PCR主混合:定义，类型，和更多

什么是实时PCR主混合?

PCR主混合液，顾名思义，是所有试剂和必要组分的预混合溶液PCR分析．它包含dntp (dATP，dGTP，dTTP,dCTP)，Taq DNA聚合酶, MgCl₂，稳定剂和增强剂在反应缓冲液。

PCR系统应用于广泛的分子生物学和03manbetx.com 包括克隆(或合成特定DNA片段)、测序、基因分型、核酸合成、基因表达、NGS文库生成和诱变。

通过提供一系列的好处，包括在制备PCR配方时节省时间和减少任何错误/交叉污染的机会，PCR主混合特别有助于研究人员和科学家提高他们的PCR检测性能。它们常用于常规或高产PCR。

商业化的PCR母料混合物有液体和冻干形式。液体形式的混合物需要储存在-20°C - 4°C之间，通常比冻干或冻干混合．

冻干的PCR母料混合物可以在室温下保存较长时间。此外，它们很容易运输，当运行PCR时，溶液只需要在缓冲溶液中重组，缓冲溶液与主混合液一起。

在本文中，我们将回顾PCR主混合物的组成，它在PCR应用中的好处，以及用于不同PCR反应的商业上可用的主混合物的类型。

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为什么PCR主混合有益?

即使反应是在严格的条件下进行的，如具有挑战性的目标序列或DNA模板，PCR主混合也具有卓越的速度、灵敏度、特异性和更高的产率．它们提供了更多的控制生产特定的PCR产品，并防止不希望的产品的可重复性。

使用PCR主混合的其他优点如下:

• 尽管单独测量和添加所有化学品，PCR主混合提供了一个预混溶液，所有必要的成分在最佳浓度下进行PCR应用。
• 聚合酶链反应主混合节省了PCR扩增反应的准备时间。
• 主混合确保了制备PCR配方时的最大一致性，即使是在进行高量测定时。
• 使用PCR主混合减少移液的步骤，从而减少污染的机会。
• 由于所有的PCR组分都已经添加到PCR主混合中，这减少了在制备PCR配方时由于缺失组分而导致错误的机会。
• 主混合的使用减少了所有管之间的可变性，这可能发生在手工准备溶液时。
• 市售的聚合酶链式反应母料必须经过质量控制和分析程序，以确保可靠和准确的聚合酶链式反应产物的可重复性。

PCR主混合应用程序和组件

PCR主混合有助于研究人员简化他们的PCR应用程序．在主混合中，DNA模板(基因组DNA或cDNA)的浓度已经优化，以有效的PCR扩增，从而加快了PCR系统的工作流程。

PCR 2X主混合液的体积一般为25 μ L，剩余体积为50 μ L(根据实验目的不同而不同)，通过添加无核酸酶水、引物和模板DNA制成。

以下是在你真正的实验中使用任何PCR主混合之前的一些技巧:

• 建议使用阳性和阴性对照来排除实验错误或检测假阳性。
• 测试少量的主混合料的效率，速度，并了解每个反应的成本。
• 可以添加稳定剂或增强剂来提高扩增效率和特异性。
• 当实验室不能预测他们的需求或不谨慎地使用PCR系统时，冷冻PCR混合物是一个很好的选择。

如果您想知道特定的主混合是否满足您的需求并有质量保证，您必须查看生产公司的网站，以获得分析证书、小册子、指南和安全数据表(SDS)。对于任何问题，你可以浏览它的常见问题部分。

应用程序

PCR主混合物的一些常见应用包括:

• 高通量多聚酶链式反应
• 常规PCR
• DNA标签
• 微阵列分析
• 基于pcr的DNA指纹鉴定(RAPD、STR和VNTR)
• 较高的特异性聚合酶链反应
• 菌落PCR
• 具有热启动DNA聚合酶的主混合物，用于:

• 多重聚合酶链反应
• 减少引物二聚体
• 设置与自动化兼容的环境温度

组件

聚合酶链反应主混合物由耐热DNA聚合酶、优化的反应缓冲液、dNTPs和MgCl₂(或经常MgSO₄)．在获得主混合物后，您只需要添加以下组件，然后再进行PCR实验:

• 引物(正向和反向)
• 缓冲区
• DNA模板
• 检测染料或荧光探针(仅在需要时)

掌握混合类型

适用于不同的PCR体系，包括标准PCR、RT-PCR和RT-qPCR的PCR主混合谱。

经过策划的商业大师组合与合适的大小或类型的DNA模板最好。例如，一些制造商提供用于0.2-2 Kb范围内的DNA扩增子的标准PCR。有些只适用于GC-rich扩增子或放大5- 6kb扩增子。

以下是一些PCR主混合的类型商业上可用的和他们的独特特点。

• 高保真PCR:扩展高保真PCR系统和PCR级氯化镁的组合₂， dNTPs和优化的反应缓冲液转化为双浓缩、即用产品。

其他一些类型的高保真主混合物包含超纯脱氧核苷酸的KOD热启动DNA聚合酶、单克隆抗体和与MgSO反应缓冲液₄．高保真聚合酶错误率极低，大大提高了反应的准确性。

• 常规型PCR主混合:适合于扩增约5 Kb大小的DNA片段，GC含量为40-60%。根据运行PCR系统的目标，进一步分为两类:

• 热态启动聚合:只能在正常的循环温度下起作用，用于防止在较低温度下产生不期望的PCR产物。
• 高保真Taq:含有一些特殊的酶，可以放大20 Kb大小的扩增子。
• Real-time qPCR主混合:对于实时PCR实验，主混合料的设计利用了染料和探针检测化学。一些主混合物已经加入了染料，如SYBR®Green或任何荧光团标记探针。然而，当它不是，你可以添加所需的染料在母版前使用。

通常,一些PCR仪器需要一种被动的参考染料，如ROX，来进行实时PCR。因此，在购买主混合之前，有必要了解您的系统需求。

柔性租赁的实验室设备

聚合酶链反应主混合物包括聚合酶链反应系统所需的所有试剂和化学品。它具有节省时间、减少错误、保证PCR反应的高一致性等优点。

主混合料可用于不同的PCR系统，包括qPCR, RT-PCR, real-time PCR，以及标准和高保真PCR。

要从市场上的产品列表中为您的实验选择完美的主混合，建议您浏览产品详细信息、规格、应用和与产品相关的资源。这也确保了更高的重复性和PCR系统的效率。

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