流式细胞计如何工作和我们如何节省时间和金钱

分析仪内的流体系统通过激光束的路径对准并在流体流中传输颗粒以进行识别。当将溶液中的样品注入仪器时，各个细胞随机分布在三维空间中。对于准确的数据收集，重要的是每个特定的单元格都通过激光束，每个单元通过单个文件。

大多数流式细胞计通过将样品流注入流动室内的更快流动的鞘流体流，以及附加的流动单元来实现这一点。鞘液的流动加速颗粒并将它们限制在样品芯的中心，从而产生单个颗粒流。该过程称为流体动力学聚焦。

在流体力学聚焦之后，每个粒子通过一束或多束光。激光的激发使荧光试剂结合在细胞或粒子上发出光，根据其特定的波长范围被检测到。光散射，通过前向散射通道(FSC)或荧光发射提供关于粒子性质的信息，而细胞粒度或内部结构复杂性是通过侧散射通道(SSC)提供的。

当使用组合荧光染料时，试剂应具有不同的发射光谱。例如，MACSQuant仪器将使用各种二向色镜和光学滤光片，将特定波长的光引导到相应的荧光探测器。这种排列创造了“荧光通道”。各种滤光片被用来控制哪些波长进入荧光通道。根据它们的光学特性，这些滤波器被称为长通、短通和带通。

• 长传球:阻止光直达某个波长。
• 短路:将光传输到一定的波长。
• 带通:在规定的波长范围内发射光

不同波长的荧光测量可以提供关于荧光色素标记的细胞表面受体或细胞内分子(如DNA和细胞因子)的定量和定性数据。氩离子激光器是最常用的流式细胞仪。这是因为它发出的488纳米光激发出一种以上的荧光色素，而激光和弧光灯是现代流式细胞术中最流行的光源。

一旦一个细胞或粒子通过激光，发射的侧面散射和荧光信号被转移到光电倍增管(pmt)和一个硅光电二极管收集前向散射信号。

所有信号通过镜子和光学滤波器系统路由到它们的光电探测器。光学滤波器通过阻止某些波长来控制检测特异性并传输其他波长。

为了将采集到的数据可视化，将测量到的每个光学参数值以不同的方式绘制出来。所使用的plot可以是单变量的也可以是双变量的。在流式细胞术中，单变量图用直方图表示，而双变量图用点图表示。

单变量图(直方图)显示一个光学参数，如荧光或光散射，针对事件数量。对于每个事件，每个测量参数的信号强度值都存储在一个数据文件中，随着事件的累积，会生成一条曲线来说明事件根据其各自的信号强度的分布。

另一方面，双变量图(点图)允许在单个图上同时显示两个光学参数。随着越来越多的事件被绘制出来，具有相似强度值的事件聚集在一起。这些细胞群通常代表特定的细胞群。

大多数细胞分选仪器可以利用从几微升到数百微升的样品量。如果你有少量珍贵的细胞，考虑使用基于微流体的流式细胞仪芯片。

微流体的开发，芯片（LOC）技术是对细胞测量术进步的最具创新性和成本效益的方法之一。

自动化样本引入分析仪允许在其他分析实验中进行步行电池存活率测定。自动化的增加还允许使用从单个测试管到多孔板的各种格式分析更多的样本。

单管通常包含在矩形网格布置或转盘形式内，以匹配用于样品制备的实验室设备。

免疫蛋白型只是流式细胞术的许多用途之一，尽管它可能是最常见的。它用于鉴定细胞上的标志物，特别是免疫系统，并允许研究人员和科学家研究细胞表达的蛋白质。

细胞识别是基于存在于细胞表面、核酸酶或细胞质上的标记或抗原，并使用抗体检测每个细胞上的标记(因此“免疫”前缀)来帮助识别细胞谱系。

免疫蛋白型可以像使用单个标记物识别细胞一样简单，或者在一个面板中施加归巢型材，激活状态和细胞因子作为应用。因此，实验方案通常会结合表面和细胞内染色。免疫分型常规用于基础研究以及诊断疾病或监测和评估残留疾病的临床应用。

免疫表型的一些例子包括区分急性髓细胞白血病和淋巴样白血病，以及B细胞和T细胞淋巴样肿瘤，其中包括慢性淋巴细胞白血病和淋巴瘤。该方法也可用于淋巴细胞的反应性和肿瘤性扩张，预测淋巴瘤的预后，以及识别淋巴细胞亚群。