什么是实时PCR主混合物？
顾名思义，PCR主混合是所有试剂的预混合解决方案和运行所需的必需组件PCR测定。它包含dntps（DATP.，dgtp，DTTP， 和DCTP.），Taq DNA聚合酶酶，mgcl.2，稳定剂和反应缓冲液中的增强剂。
PCR系统在广泛的分子生物学和03manbetx.com 实验，包括克隆（或特定DNA片段的合成），测序，基因分型，核酸合成，基因表达，NGS文库的产生，以及诱变。
PCR主混合物特异性地帮助研究人员和科学家通过提供一种益处来增强它们的PCR测定性能，包括节省时间并降低制备PCR配方中的任何误差/交叉污染的机会。它们通常用于常规或高产PCR。
商业PCR主混合物有液体和冻干形式。液态混合物必须在-20°C - 4°C之间的温度下储存，并且通常比冻干或冷冻干混合。
冻干的PCR主混合物可以在环境温度上储存更长的时间。此外，它们易于运输，并且在运行PCR时，该解决方案仅需要在带有主混合物的缓冲区解决方案中重构。
在本文中，我们将审查PCR主混合物的组分，其PCR应用中的益处，以及用于不同PCR反应的市售主混合物的类型。
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为什么PCR主混合有益？
PCR主混合物具有较高的速度，灵敏度，特异性和较高的产率，即使在严格条件下进行反应，例如具有挑战性的目标序列或DNA模板。它们提供了对生产特定PCR产品的更多控制权，并防止了不希望产品的可重复性。
下面列出了使用PCR主混合物的其他一些优点：
- 尽管测量和分别添加所有化学物质，但PCR主混合物提供了一个预混合的解决方案，其所有必要组件以最佳的浓度用于运行PCR应用。
- PCR主混合物可节省PCR扩增反应的制备时间。
- 当在进行高批量测定时，主混合物在制备PCR配方时保证最大一致性。
- 使用PCR主混合减少移液步骤，从而减少污染的机会。
- 由于所有PCR组分在PCR主混合物中添加，它会减少由于在制备PCR制剂的同时由于缺失的组分而导致的误差的可能性。
- 使用主混合物的使用可降低所有管子之间的变异性，在手动准备溶液时可能发生。
- 市售PCR主混合物受到质量控制和分析程序的约束，这确保了可靠和准确的PCR产品的可重复性。
PCR主混合应用程序和组件
PCR主混合物有助于研究人员简化他们的PCR应用。在主混合物中，已经对DNA模板（基因组DNA或cDNA）的浓度进行了优化，以有效地扩增PCR，从而加速了PCR系统的工作流程。
PCR 2X主混合物通常以25μL的体积使用，并且通过添加不含核酸酶的水，引物和模板DNA来制备50μL的静物体积（根据实验目标而不同）。
下面给出了在实际实验中使用任何PCR主混合物之前的某些提示：
- 建议使用正负对照来解决实验错误或检测误报。
- 测试少量主混合物的效率，速度并了解每个反应的成本。
- 您可以添加稳定剂或增强剂以增强放大效率和特异性。
- 当实验室无法轻蔑地预测他们的需求或使用PCR系统时，冷冻PCR混合物是一个很好的选择。
如果您想知道特定的主混音是否满足您的需求并提供质量保证，您必须检查生产公司的网站是否有用于分析，小册子，指南和安全数据表（SDS）的证书。对于任何问题，您可以通过其常见问题解答部分浏览。
应用程序
PCR主混合物的一些常见应用包括：
- 高通量PCR
- 常规PCR.
- DNA标记
- 微阵列分析
- 基于PCR的DNA指纹识别（RAPD，STR和VNTR）
- 高特异性PCR
- 殖民地
- 具有热启动DNA聚合酶的主混合物，用于：
- 多重PCR
- 减少底漆二聚体
- 设置与自动化兼容的环境温度
组件
PCR主混合物由可热稳定的DNA聚合酶，优化的反应缓冲液，DNTP和mgcl.2（或经常mgso4.）。获取主混音后，只需要在进行PCR实验之前添加以下组件：
- 底漆（前向和逆转）
- 缓冲
- 模板DNA
- 检测染料或荧光团探针（仅在需要时）
主组合类型
可提供一系列PCR主混合物，适合不同的PCR系统，包括标准PCR，RT-PCR和RT-QPCR。
精选的商业主混合物最适合合适的DNA模板。例如，一些制造商提供的标准PCR可用于扩增DNA扩增子，范围为0.2-2 kb。有些仅适用于富含GC的扩增子或扩增5-6 kb扩增子。
下面给出的是一些PCR主混合的类型市售及其独特的功能。
- 高保真PCR：扩大高保真PCR系统和PCR级MgCl的组合2，DNTP和优化的反应缓冲液成双重浓缩的现成产品。
一些其他类型的高保真主混合物含有kod热启动DNA聚合酶，具有超纯脱氧核苷酸，单克隆抗体和与MgSO的反应缓冲液4.。高保真聚合酶的错误率非常低，并且高度提高了反应的准确性。
- 常规类型PCR主混音：适用于扩增大小为约5kb的DNA片段并具有40-60％的GC含量。它进一步分为两个子类别，基于运行PCR系统的目标：
- 热门taq：只能在正常循环条件温度下起作用，用于防止不需要的PCR产物在较低温度下形成。
- 高保真塔克：含有一些专用酶，可以扩增尺寸高达20kb的扩增子。
- 实时QPCR主混音：对于实时PCR实验，设计母料混合物以利用染料和探针检测化学。一些主混合物已经加入添加的染料，例如Sybr®Green或任何荧光团标记探针。但是，当不是，您可以在使用前添加主机中所需的染料。
经常，一些PCR乐器需要被动参考染料，例如ROX，以执行实时PCR。因此，在购买主混合物之前，有必要了解您的系统要求。
灵活租赁的实验室设备
PCR母系混合物包括运行PCR系统所需的所有试剂和化学品。从节省时间和减少错误以保证进行PCR反应的更高一致性，它有几个优点。
母系混合物可商购可用于不同的PCR系统，包括QPCR，RT-PCR，实时PCR和标准和高保真PCR。
为了从市场上可用的产品列表中为您的实验选择完美的主混合物，建议您仔细研究与产品相关的产品详细信息，规格，应用和资源。这也确保了PCR系统的更高可重现性和效率。
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