考马斯蓝染色:定义和概述

定义:考马斯蓝渍

考马斯亮蓝是一种染料通常用于实验室的蛋白染色协议，在SDS-PAGE或聚丙烯酰胺凝胶电泳后进行。这些蛋白质染料的染色化学是基于它们与蛋白质和基质的结合。

的染料形成复合物利用蛋白质的基本氨基酸残基，包括精氨酸、组氨酸、酪氨酸和赖氨酸进行可视化。这种结合赋予蛋白质整体负电荷，并根据其分子量促进其从SDS-PAGE凝胶分离。

考马斯亮蓝具有检测30- 100ng蛋白质的潜力。然而，其敏感性取决于染色方法中使用的染色类型(考马斯亮蓝G-250和考马斯亮蓝R-250)。

用染料染色后，你会看到蓝色背景下的蓝色条纹。背景噪音也应该减少，以使波段更容易可视化。这是通过使用脱色溶液来完成的，这需要大约10分钟到一夜的时间来去除多余的污渍，并产生背景清晰的条带。

考马斯亮蓝最早由科学家沃尔克·纽霍夫(Volker Neuhoff)描述，它的名字来自一个非洲城市库马西(Kumasi)，这个城市之前被称为考马斯亮蓝。你一定也知道这个名字“考马西”是一个注册商标帝国化学工业公司

这种染料的化学式是C₄₇H₅₀N_3.NaO₇年代₂(钠盐)的摩尔质量是3g /mol。它在热水和乙醇中溶解良好，但在冷水中略有溶解。

在这篇文章中，我们将简要介绍考马斯亮蓝的类型，它们在实验室分析中的应用，以及在工业领域中广泛使用这种染料的各种用途。

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考马斯亮蓝的类型

根据其性质、分子特征、染色能力和敏感性，考马斯亮蓝分为两种:考马斯亮蓝G-250和考马斯亮蓝R-250。

考马斯亮蓝G-250

考马斯亮蓝G-250(或胶体考马斯蓝)含有两个甲基，这在染料的R-250版本中是没有的。名字中的“G”表示染料的绿色。

图:考马斯亮蓝G-250的结构。

考马斯亮蓝有三种形式:阳离子(红色)、中性(绿色)和阴离子(蓝色)。在酸性条件下，红色考马斯红与蛋白质结合后会转化为蓝色。然而，当没有装订时，它仍然是棕色的。

在考马斯亮蓝与蛋白质形成复合物的过程中，发生的反应包括以下步骤:

染料将一个自由电子转移到可被电离的蛋白质基团上。
电子向蛋白质的转移破坏了蛋白质的固有结构，暴露了其疏水囊。
染料的非极性组分通过范德华力与蛋白质的疏水囊结合。
通过反应的离子相互作用和复合物的形成使蛋白质凝胶中分离的蛋白带可视化。

最好的商业考马斯色染料是那些具有高灵敏度，优越的再现性和低背景。此外，它们应该为不同的实验室分析提供灵活的染色和脱色时间。

考马斯亮蓝R-250

考马斯亮蓝R-250是二磺化三苯基甲烷化合物的另一种形式。名字中的“R”表示染料的淡红色。

1963年，法泽卡斯·德·圣·格罗斯(Fazekas de St. Groth)和他的同事首次使用考马斯亮蓝R-250，在蛋白质凝胶电泳后，用来观察醋酸纤维素薄片上分离的蛋白质。

图:考马斯亮蓝R-250的结构。

考马斯亮蓝R-250染色液是聚丙烯酰胺蛋白凝胶或IEF微凝胶染色最快的方法。它的更低的成本和更好的分辨率比G-250形式的染料

考马斯亮蓝的应用

考马斯亮蓝染色是一种高效、简单、快速、经济的蛋白质凝胶染色技术。可常规用于蛋白质组学相关研究，如质谱、SDS-PAGE、IEF等，检测约0.1-0.5 μ g蛋白。该方案使用考马斯亮蓝R-250在甲醇/醋酸溶液中，在室温下轻轻摇晃来染色蛋白质。

另一种高灵敏度的蛋白质可视化技术是银染色。然而，这是一个繁琐的过程，因为涉及多个步骤和许多解决方案。

以下是两种实验室常规应用，包括使用考马斯亮蓝染色剂以及制备染色液所需的其他试剂。

电泳

聚丙烯酰胺(由丙烯酰胺和双丙烯酰胺混合而成)凝胶电泳技术是一种根据蛋白质分子量分离蛋白质进行分子生物学实验和蛋白质分析的技术。分离的蛋白质可以用考马斯亮蓝、荧光或银染色法检测。
考马斯蓝是一种不固定的颜色一种快速、方便、低成本、易操作、实验室广泛应用的蛋白质染色方法。此外，与其他染色技术相比，它也是一种更兼容质谱(MS)的方法。

化验

蛋白质浓度的测定是许多蛋白质组学和蛋白质研究中必不可少的实验研究之一。
考马斯亮蓝是一种广泛应用于蛋白质测定的染色剂，如布拉德福德测定法。它的原理是把染料和蛋白质分子结合在一起。

使用考马斯蓝染色的行业

作为一种高效的染料，考马斯亮蓝被用于一系列实验室和工业的几个应用目的。的一些涉及染料使用的区域在下面提到。

生物化学

G-250型染色剂与其他试剂(如乙醇(或甲醇)、磷酸和硫酸铵)一起用于染色配方。它被用于蛋白质凝胶染色和布拉德福德实验。
此外，在western blot分析中，染料被用作负载控制染色方法，被用作阴离子抗体前染色。

医学

考马斯亮蓝是许多实验室实验研究的一部分，包括治疗脊柱损伤。该疗法已在实验室老鼠身上发现有效，但对人类的疗效尚不清楚。
这种染料还可以帮助医生进行视网膜手术。

法医科学

考马斯亮蓝与蛋白质形成复合物的能力使其能够用于布拉德福德分析的指纹分析。
女性指纹的吸光度高于男性指纹，是一种有效的生物性别鉴定方法。
该技术比茚三酮化学测定法更可取、更简单、更容易，茚三酮化学测定法需要测定制剂，并在过程中使用一系列酶。

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考马斯亮蓝是一种应用广泛的蛋白质染色技术。蛋白质在电泳凝胶上分离后，使用含有考马斯亮蓝的染色溶液对其进行染色。这种染料有助于以蓝色带的形式显示蛋白质。

然而，在染色过程中，凝胶基质也被染色。因此，为了去除背景色，在凝胶上应用脱色溶液，以便在清晰的背景上更好地显示蓝色蛋白条带。

除了用于蛋白质可视化，这种染料还用于确定样品中蛋白质的浓度，以及在法医实验室中识别给定指纹的性别。

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