什么是蛋白质梯子或蛋白质标记物?

Western blot成像和涉及的步骤

蛋白质梯子用于估计感兴趣的蛋白质的实验中,并使用凝胶电泳。它们也被称为蛋白质标记,蛋白质标准品或蛋白质分子量标记。

蛋白质梯子含有高度纯化的定义或已知分子量蛋白质的混合物。它们充当蛋白质在蛋白质印迹中电泳转移期间蛋白质的参考点。

他们在03manbetx.com 用于蛋白质分析,例如了解蛋白质的功能作用和机制和蛋白质发现。

本文介绍了蛋白质梯子的工作机理和多种不同类型用于生物学和化学测定

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蛋白质梯子如何工作?

蛋白梯用于估计凝胶电泳过程中蛋白质分子的近似大小。

构成蛋白质梯子的纯化蛋白的混合物通过凝胶移动,并根据其分子量(即,从最大的分子量(最接近样品良好良好)到最低的分子量(远离样品负载良好良好良好井)的分子量,即从最大的分子量(最接近样品载荷良好)排列的混合物。)。

这是因为:

  • 较小的蛋白质可以轻松地穿过凝胶基质的小孔,并从样品载荷(即,即向正电极)移动最远。
  • 大型蛋白质通过基质的小孔的运动受到阻碍,从而使它们保持靠近样品载荷的良好,即更接近负电极。

蛋白质凝胶电泳期间看到的样品载荷车道和运动蛋白的方向

数字:一个说明了蛋白质凝胶电泳过程中蛋白质的样品载荷车道和蛋白质运动的方向。

凝胶基质中蛋白质的运动还取决于SDS-PAGE缓冲液系统(无论是Tris-甘氨酸缓冲液,BIS-TRIS MOPS缓冲液还是BIS-Tris MES MES缓冲液)。凝胶中的蛋白质梯子以带的形式可见,并用作参考带,表示样品蛋白的大小。

免疫印迹第一列中蛋白质梯子的蛋白质电泳的结果

数字:免疫印迹第一列中蛋白电泳的蛋白质电泳图片。

蛋白梯的常见类型

预先使用的蛋白质梯子

顾名思义,预先使用的蛋白质梯子的蛋白质混合物含有颜色。它们可以具有所有蛋白质,具有一种颜色,两种或多种蛋白质以不同的颜色预应,或者用不同颜色预料的所有蛋白质。

预先获得的蛋白质梯子具有三个高强度的彩色参考带,分别为25 kDa,50 kDa和75 kDa(kilodaltons)。这些带使监测蛋白质迁移模式并计算蛋白质的分子量变得更加容易。

预先呈现的蛋白质梯子通常有两种类型:

  • 预先呈现的天然蛋白质梯子:当用一种或多种颜色染色时,它们会产生宽带,并显示与每种蛋白质结合的染料的数量和位置变异性。研究人员通常不喜欢这些,因为它们倾向于产生模糊的宽带。
  • 预先获得的重组蛋白梯子:这些是研究用途的高度首选梯子。它们经过设计,使其产生带有不同颜色的鲜艳,间隔均匀的蛋白质,使估计蛋白质的近似分子量变得更容易,更简单。

大多数商用预香油蛋白梯子可作为三色蛋白标准品,具有10-12个蛋白质。它们在加载缓冲液中提供,用于在凝胶车道中直接加载。

用于这些梯子的储存缓冲液由柠檬酸盐/磷酸盐,尿素,硫酸钠硫酸钠,DTT,EDTA和15%甘油等试剂组成。

预先染色的蛋白梯,显示不同的颜色

数字:具有不同颜色的预染色蛋白梯的图像。

预先使用的蛋白质梯子在:

  • SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(或SDS-PAGE)以监测蛋白质分离。
  • 蛋白质印迹转移以测试蛋白质蛋白质蛋白质蛋白上蛋白质的转移效率。
  • 通过将蛋白质图像与梯子进行比较,从膜印迹的图像中计算出蛋白质的明显分子量,通过将蛋白质与用抗体染色蛋白质后获得的图像进行比较。

未染色的蛋白质梯子

未染色的蛋白质梯子是易于纯化蛋白质的混合物,这些蛋白质未用任何颜色染色染色。它们允许在凝胶中形成可识别的锋利带,从而准确估计蛋白质的分子量

凝胶中的带中最常使用Coomassie亮蓝色R-250污渍。在膜印迹上,使用Ponceau或任何其他类似污渍对其进行可视化。

未染色的蛋白质梯子可以准确估算蛋白质,因为与预先蛋白质梯子不同,染料的结合并不阻碍它们的凝胶基质运动。

一个未染色的蛋白梯,带有带有coomassie蓝色染色的条带进行可视化

数字:未染色的蛋白梯子的图像。乐队用Coomassie Blue染色以进行可视化。

蛋白质印迹蛋白梯

Western印迹蛋白质梯子是预染色的链霉素HRP结合蛋白(或链球菌标记的重组蛋白)的混合物。它可以使蛋白质凝胶以及化学发光或蛋白质印迹的化学免疫检测的荧光可视化。

在膜上完整转移蛋白质梯子后,使用各种技术来收集了三个蛋白质印迹结果

数字:在膜上蛋白质印迹蛋白梯子完全转移后,使用不同的技术可视化蛋白质印迹。

荧光蛋白梯子

荧光蛋白梯子用于SDS-PAGE凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳(涉及三甘氨酸缓冲液)。它们包含蛋白质的混合物,这些蛋白质已预先染色荧光染料。当特定波长的光落在其上时,频带荧光。

这些梯子在研究人员中很受欢迎,因为它们仅具有轻微的背景干扰,灵敏度和最佳的线性动态范围。

使用荧光蛋白梯子观察到的条带的光强度与蛋白质的浓度成正比,即蛋白质的浓度越多,带的光强度就越强。这使研究人员更容易可视化和量化蛋白质条带。

预先染色的蛋白梯,带有不同颜色的斑点和凝胶

数字:图像显示了带有荧光蛋白梯子的凝胶和印迹。

*注意:始终建议参考制造商或公司的数据表,以了解有关研究用途的更多信息或有关市售蛋白质梯子的任何详细信息。

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蛋白质梯子是蛋白质的混合物,在蛋白质凝胶电泳过程中充当参考点。它们根据其大小(从最大的蛋白质到最小的蛋白质)在凝胶基质中移动,朝着阳性电极的方向移动。

蛋白质梯子有不同类型。一些最常用和广泛使用的包括预先贴发的,未染色的,蛋白质印迹和荧光蛋白梯子。这些广泛用于凝胶电泳和蛋白质印迹测定监测蛋白质运动并量化带。

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蛋白质梯子用于估计感兴趣的蛋白质的实验中,并使用凝胶电泳。它们也被称为蛋白质标记,蛋白质标准品或蛋白质分子量标记。

蛋白质梯子含有高度纯化的定义或已知分子量蛋白质的混合物。它们充当蛋白质在蛋白质印迹中电泳转移期间蛋白质的参考点。

他们在03manbetx.com 用于蛋白质分析,例如了解蛋白质的功能作用和机制和蛋白质发现。

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蛋白质梯子如何工作?

蛋白梯用于估计凝胶电泳过程中蛋白质分子的近似大小。

构成蛋白质梯子的纯化蛋白的混合物通过凝胶移动,并根据其分子量(即,从最大的分子量(最接近样品良好良好)到最低的分子量(远离样品负载良好良好良好井)的分子量,即从最大的分子量(最接近样品载荷良好)排列的混合物。)。

这是因为:

  • 较小的蛋白质可以轻松地穿过凝胶基质的小孔,并从样品载荷(即,即向正电极)移动最远。
  • 大型蛋白质通过基质的小孔的运动受到阻碍,从而使它们保持靠近样品载荷的良好,即更接近负电极。

蛋白质凝胶电泳期间看到的样品载荷车道和运动蛋白的方向

数字:一个说明了蛋白质凝胶电泳过程中蛋白质的样品载荷车道和蛋白质运动的方向。

凝胶基质中蛋白质的运动还取决于SDS-PAGE缓冲液系统(无论是Tris-甘氨酸缓冲液,BIS-TRIS MOPS缓冲液还是BIS-Tris MES MES缓冲液)。凝胶中的蛋白质梯子以带的形式可见,并用作参考带,表示样品蛋白的大小。

免疫印迹第一列中蛋白质梯子的蛋白质电泳的结果

数字:免疫印迹第一列中蛋白电泳的蛋白质电泳图片。

蛋白梯的常见类型

预先使用的蛋白质梯子

顾名思义,预先使用的蛋白质梯子的蛋白质混合物含有颜色。它们可以具有所有蛋白质,具有一种颜色,两种或多种蛋白质以不同的颜色预应,或者用不同颜色预料的所有蛋白质。

预先获得的蛋白质梯子具有三个高强度的彩色参考带,分别为25 kDa,50 kDa和75 kDa(kilodaltons)。这些带使监测蛋白质迁移模式并计算蛋白质的分子量变得更加容易。

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预先染色的蛋白梯,带有不同颜色的斑点和凝胶

数字:具有不同颜色的预染色蛋白梯的图像。

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  • SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(或SDS-PAGE)以监测蛋白质分离。
  • 蛋白质印迹转移以测试蛋白质蛋白质蛋白质蛋白上蛋白质的转移效率。
  • 通过将蛋白质图像与梯子进行比较,从膜印迹的图像中计算出蛋白质的明显分子量,通过将蛋白质与用抗体染色蛋白质后获得的图像进行比较。

未染色的蛋白质梯子

未染色的蛋白质梯子是易于纯化蛋白质的混合物,这些蛋白质未用任何颜色染色染色。它们允许在凝胶中形成可识别的锋利带,从而准确估计蛋白质的分子量

凝胶中的带中最常使用Coomassie亮蓝色R-250污渍。在膜印迹上,使用Ponceau或任何其他类似污渍对其进行可视化。

未染色的蛋白质梯子可以准确估算蛋白质,因为与预先蛋白质梯子不同,染料的结合并不阻碍它们的凝胶基质运动。

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蛋白质印迹蛋白梯

Western印迹蛋白质梯子是预染色的链霉素HRP结合蛋白(或链球菌标记的重组蛋白)的混合物。它可以使蛋白质凝胶以及化学发光或蛋白质印迹的化学免疫检测的荧光可视化。

在膜上完整转移蛋白质梯子后,使用各种技术来收集了三个蛋白质印迹结果

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荧光蛋白梯子

荧光蛋白梯子用于SDS-PAGE凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳(涉及三甘氨酸缓冲液)。它们包含蛋白质的混合物,这些蛋白质已预先染色荧光染料。当特定波长的光落在其上时,频带荧光。

这些梯子在研究人员中很受欢迎,因为它们仅具有轻微的背景干扰,灵敏度和最佳的线性动态范围。

使用荧光蛋白梯子观察到的条带的光强度与蛋白质的浓度成正比,即蛋白质的浓度越多,带的光强度就越强。这使研究人员更容易可视化和量化蛋白质条带。

预先染色的蛋白梯,带有不同颜色的斑点和凝胶

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蛋白质梯子有不同类型。一些最常用和广泛使用的包括预先贴发的,未染色的,蛋白质印迹和荧光蛋白梯子。这些广泛用于凝胶电泳和蛋白质印迹测定监测蛋白质运动并量化带。

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