蛋白A树脂:定义和概述

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定义:蛋白A树脂

蛋白质提取的一种树脂是一种高亲和层析介质。它用于从细胞培养基中一步纯化单克隆抗体产品(mAb)和免疫球蛋白。

蛋白质A是一种49 kDa蛋白质编码的水疗中心基因.最初,它是作为细菌细胞壁上的1型膜蛋白被发现的金黄色葡萄球菌在那里,它受到细胞渗透压、细胞拓扑结构和一个名为ArlS-ArlR的双组分系统的调节。

它在细菌中发挥多种作用,例如:

  • 损害免疫反应,促进细菌的吞噬。
  • 个体中的致残抗体介导的免疫反应。
  • 促进细菌与宿主表面结合致病。
  • 这种蛋白质还促进生物膜的形成。

除蛋白A外,细菌还有其他与免疫球蛋白结合的细菌蛋白,如蛋白A/G、蛋白L和蛋白G。

从结构上看,Protein A包含5个ig结合域,每个域都可以结合多种哺乳动物蛋白-尤其是人类免疫球蛋白.其对抗体的高选择性有助于有效清除宿主细胞蛋白质、DNA和病毒。

在过去,野生型蛋白质被用作实验室应用过程中的配体。然而,目前在大肠杆菌中产生的重组蛋白A是最常见的一种。

结构修改天然蛋白A具有单域多聚体和多结合位点等特点,对抗体Fc区特异性高,结合能力强,物理化学稳定性好。

改进的特性也导致了一个高度稳定和稳健的蛋白a亲和树脂的形成,它被广泛用于生物技术和免疫学研究的下游加工和纯化过程。

在本文结束时,您将学习蛋白质A树脂的类型,其应用领域,以及涉及树脂的使用的分析。

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蛋白A树脂概述

蛋白A树脂附着到各种各样的基本指标,如涂层聚苯乙烯,水凝胶填充到陶瓷壳,交联琼脂糖,表面改性多孔玻璃,以及其他基于有机聚合物的材料。

蛋白A层析树脂在纯化过程中是至关重要的。它允许治疗性抗体纯化过程中严格的纯度水平。例如,它能够去除杂质,并将宿主细胞蛋白质降至<100 ppm, DNA降至<10 pg/剂量。

市面上的蛋白A,如MabSelect, MabSelect SuRe和ProSep Ultra Plus,根据蛋白A配体来源、珠粒大小、基质组成和孔径大小的不同而不同。因此,它们的结合能力、耐化学性、传质性能和树脂压缩性也不同,影响了Protein A柱的性能。

琼脂糖珠

蛋白A琼脂糖珠是实验室或行业中最常用的矩阵。琼脂糖珠通过酰胺键形成与蛋白A树脂交联。这些珠粒具有高的抗体容量和亲和力。

此外,Protein A琼脂珠还能抵抗潮变剂(如盐酸胍和硫氰酸钾)、尿素,pH值范围较宽(从2-11)。因此,即使在苛刻的洗脱条件下,如去除结合抗体时,它也不会破裂或受损。

蛋白A树脂的应用

蛋白A树脂有无数的应用,从亲和层析分析,免疫沉淀,到生物制造和生物加工分析。由于其特异性,该树脂是首选的标准技术,以捕获在纯化过程中的抗体。

在所有可用的商业蛋白中,重组链球菌蛋白A表达于大肠杆菌是应用广泛的树脂。然而,它是敏感的碱性条件,因此,不能适用于严格和成本效益高的CIP和NaOH涉及的消毒协议。

色谱法

色谱法是一种从混合物中分离成分的实验室技术。Protein A亲和层析技术广泛用于实验室捕获和纯化免疫球蛋白,如IgG和单克隆抗体产品。该过程的原理是结合特定的抗体固定化蛋白A配体。

在试验期间,蛋白质A树脂与4%的琼脂糖连接,在此之后,结合被优化,以实现对免疫球蛋白的高结合能力。几个因素决定了树脂对抗体的动态结合能力,如流速和目标抗体。

免疫沉淀反应

免疫共沉淀法是一种亲和纯化抗原的技术。在这里,抗体被固定在琼脂糖树脂表面,这允许它们与溶液中的特定抗原有效结合。

蛋白A树脂以三明治的形式使用纯化抗体来纯化复合物、蛋白质和抗原分子。此外,它还有助于沉淀抗体从各种复杂的混合物。

生物工艺

生物加工涉及使用生命成分,如细胞成分和病毒,来制造和获得所需产品。蛋白A树脂作为一种具有成本效益的方法经常被工业用于正常抗体和单克隆抗体产品的下游加工。

蛋白A树脂工业

蛋白A树脂具有高容量、高亲和力。因此,它们被用于实验室和工业,以获得抗体产品。

生命科学/生物技术

Protein A树脂用于一系列生命科学实验室,包括生物化学,生物物理学和免疫学实验室,需要纯化各种抗体和抗体产品的分析。

医疗保健

Protein A被用于医疗保健行业的药物研发,主要是因为它对人类IgG具有高度的特异性和选择性,用于治疗癌症和自身免疫性疾病等疾病。

此外,它的用于生物制药行业在生产符合gmp的生物制剂的过程中,这些生物制剂被批准用于临床和商业化。

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蛋白A树脂是用于纯化一系列抗体和单克隆抗体产品的层析介质。蛋白质A是从细菌中分离出来的金黄色葡萄球菌它参与了许多过程,包括损害宿主免疫反应和生物膜的形成。

市售树脂是表达于大肠杆菌.在大多数情况下,将Protein A树脂与琼脂糖珠结合,因为它们具有高的结合能力、高亲和力和特异性,可以结合抗体并促进其纯化。

色谱和免疫沉淀分析是稳健的技术,需要高质量的试剂和01manbetx 达到期望的结果。然而,所涉及的仪器价格昂贵,使得小型和新兴实验室很难获得它们。

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