酶链接的免疫吸附测定法(ELISA)

酶联免疫吸附测定(ELISA)的四个步骤

概述和资源

ELISA是酶联免疫吸附测定的缩写,是一种基于板的测定技术,用于分析生物化学和其他研究领域,用于检测和量化复杂混合物中的蛋白质,抗体和肽等可溶性物质。该技术有时也称为EIA或酶免疫测定法,尽管命名有所不同,但该技术是相同的。

Elisa最初是由Engvall和Perlmann1971年。ELISA实现了蛋白质和其他样品的分析,这些蛋白质和其他样品已使用特定抗体固定在微板孔中。这些免疫测定通常在96孔或384孔聚苯乙烯板中进行,可被动结合抗体和蛋白质。

这些测定很容易设计,并且易于执行。使用试剂将蛋白质结合并固定在微板表面上,在测定过程中,结合材料的分离比其他分离方法要简单得多。

此外,使用高亲和力抗体洗净非特异性结合材料使ELISA成为测量粗制剂中特定分析物的强大工具。

尽管有许多用于不同情况的ELISA变体,但每种方法都取决于相同的基本元素:

  1. 涂层和捕获:抗原直接或间接固定在聚苯乙烯微板孔的表面上。
  2. 板块阻塞:添加无关的蛋白质或其他分子覆盖了微板孔的所有不饱和表面结合位点。
  3. 探测与检测:抗原特异性抗体孵育并基于亲和力与抗原结合。
  4. 信号检测:最后,生成的信号是通过特定抗体上的直接或辅助标签测量的。

ELISA中一些最常用的酶标记包括辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)。但是,还有其他酶,包括β-半乳糖苷酶,乙酰胆碱酯酶和过氧化氢酶。底物也用于免疫测定法。

底物的选择取决于测定灵敏度和用于检测信号的仪器类型,例如荧光计,发光计或分光光度计。此外,已优化了各种可用的选择,用于在ELISA中与HRP或AP共轭物一起使用。

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