DNA和蛋白质电泳
什么是电泳&如何工作?
电泳是一种实验室技术,用于运输带电的蛋白质分子和核酸通过溶剂使用带电场。它被认为是一种简单、快速、灵敏的分析技术。
许多生物分子在除其等电点以外的任何pH值水平上都携带净电荷,并以与其电荷密度成比例的速率迁移。
分子在电场中的迁移率取决于以下几点:
- 磁场强度
- 分子上的净电荷
- 分子的大小和形状
- 离子强度
- 基质的性质,如孔径和粘度
电泳中使用不同类型的基质,包括聚丙烯酰胺和琼脂糖。它们都是凝胶的一种。作为凝胶基质,聚丙烯酰胺和琼脂糖提供了一种多孔介质,其本质上是一种过滤器。
聚丙烯酰胺的孔径较小,适合分离大量蛋白质和较小的核酸,而琼脂糖的孔径较大,适合分离较大的大分子,如蛋白质复合物和大的核酸。
多种形式的凝胶电泳用于分离核酸和蛋白质,包括聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。单是这种形式就有几个变种,可以提供有关特定蛋白质的各种信息。
例如,变性还原性十二烷基硫酸钠PAGE (SDS-PAGE)用不连续缓冲体系是应用最广泛的电泳和分离技术
主要按质量计算的蛋白质。非变性PAGE (non - denaturing PAGE)也叫天然PAGE,是根据蛋白质的质量/电荷比来分离蛋白质的。二维PAGE在第一个维度按天然等电点分离蛋白质,在第二个维度按质量分离蛋白质。
一旦蛋白质或核酸通过电泳分离,就可以在凝胶基质中使用不同的染色剂进行检测。然后将它们转移到膜上,通过western blotting检测或使用质谱分析。因此,DNA和蛋白质凝胶电泳是蛋白质组学中必不可少的一步。
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