免疫组织化学的工作方式以及我们如何节省您的时间和金钱

必须从患者的诊断中获得组织样本。切除后，该样本必须经历固定过程。这是使用物理或化学方法完成的。根据研究的组织类型，通常优选一种特定方法。固定很重要，因为它保持组织结构并确保抗原性，可检测到的抗原。

固定的一个示例包括保存样品的福尔马林固定，石蜡包裹的方法，该方法也称为FFPE。将样品立即浸入甲醛中，该甲醛维持组织的结构和抗原，然后脱水，以便将其嵌入石蜡蜡块中。

这使得样品的切片非常薄，因为必须将切片安装到微观幻灯片上进行检查。

化学修饰，例如FFPE方法，可以使组织样品中抗原或蛋白质的可检测性难以进行。抗原检索剂可通过消除或减少化学处理的作用来帮助改善抗原表达。

通过分解福尔马林诱导的抗原交联，抗原上的表位被重新暴露于结合。表位是与抗体结合的抗原分子的一部分。抗体用于附着在特定靶抗原上。通过重新暴露抗原，原代和继发抗体（例如多克隆和单克隆抗体）可以更容易与样品结合，有效地染色靶抗原以进行检测。

抗原检索的两种主要方法是热和酶检索，或热诱导的表位检索（HIER）和蛋白酶诱导的表位检索（码头）。

至关重要的是，防止抗体和试剂与用于IHC的样品的组织的非特异性结合是必不可少的。即使抗体对靶抗原具有很高的特异性，也可能发生非特异性结合。这包括吸附到不同类型表面的抗体，与蛋白质的基于电荷的结合以及疏水相互作用，这都有效地阻止了组织样品中靶向抗原的准确可视化。

阻塞通常是在标记和可视化之前在组织样品上执行的最后一个制备步骤。样品得到适当处理后，将其在预定的时间内孵育，在环境室温下或保持在4°C的冰箱中，可能从30分钟到过夜。

在孵育后洗涤样品可能会发生，但不一定是必需的，因为它可能会稀释主要抗体。一些常见的缓冲液类型包括常规血清，血清和牛血清白蛋白（BSA）等蛋白质溶液以及含有高度纯化的单蛋白或无蛋白质化合物的预成型的商业缓冲液。

一旦正确准备了组织样品，就会发生染色。这可以使用两种不同的方法（一种间接测定或直接标记）来完成。间接测定，也称为间接标签，需要两个主要步骤：

1. 在组织样品上孵育一抗的一抗使其与抗原结合。完成此操作后，在与标记的抗体孵育之前，可以将任何多余的未结合抗体洗净。
2. 发生了另一个孵育时期，其中任何多余的未结合二抗可以洗掉，并量化了与原代抗体相关的标签。

由于使用二抗体，该方法被认为更敏感，但需要更多的时间，涉及的洗涤步骤可能会影响染色的扩增。直接标记比间接标记更快，因为它仅需要一种染色抗体。该方法涉及靶抗原直接与标记的原代抗体反应，从而消除了多次孵育和洗涤步骤的需求。

尽管简单而快速，但直接标记的敏感性却差得多，并且与间接标记相比会产生较低的信号扩增。

IHC染色已被用作诊断工具已有一段时间了，但最近开始自动化。为了降低许多组织学和医学实验室的效率负面影响，涉及IHC染色的费力手动制剂被替换为自动化。

几个步骤的自动化使实验室技术人员的工作在面对员工短缺时越来越可以管理，并减少了对IHC进行密集培训的要求，从而有效地在可用员工的大部分地区之间分配了工作量。